由于可電離化合物的保留對(duì)流動(dòng)相 pH 值非常敏感，因此必須通過(guò)添加緩沖液來(lái)控制流動(dòng)相的 pH 值。 添加少量酸或堿時(shí)，緩沖液可保持 pH 值。 許多不同的物質(zhì)已用于 HPLC 中的緩沖。

用于帶 UV 檢測(cè)的 HPLC 的zui常用緩沖液是磷酸鹽和醋酸鹽。 磷酸鹽和醋酸鹽是特別有用的緩沖液，因?yàn)樗鼈兛梢栽诘陀?220 nm 的波長(zhǎng)下使用。

當(dāng)質(zhì)譜儀用作 LC 檢測(cè)器 (LC-MS) 時(shí)，流動(dòng)相必須是揮發(fā)性的，因?yàn)?LC-MS 接口的功能之一是使流動(dòng)相汽化。 這意味著不能使用zui常用的 LC-UV 工作緩沖液磷酸鹽。 幾種緩沖液的揮發(fā)性足以滿足 LC-MS 使用的要求。 LC-MS 應(yīng)用中zui常見的 HPLC 緩沖液是醋酸鹽、TFA (0.1%)、甲酸、甲酸銨和碳酸氫銨。