[色譜柱的使用]如何快速新建中藥配方顆粒的指紋圖譜液相方法?
關于Waters色譜柱在中藥配方顆粒中比較有優(yōu)勢的幾款色譜柱,色譜條件該怎么建、什么時候需要進行色譜柱篩選,很多小伙伴還是存在很多疑問。
今天,小編就結合實際案例跟大家分享如何快速新建指紋譜圖液相分析方法。
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流動相A:0.1%磷酸
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流動相B:乙腈
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流速:0.4 mL/min
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波長:205 nm+全波長
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柱溫:30度
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進樣量:1 μL
圖2. 梯度表
按照如上色譜條件,將提取的配方顆粒樣品集中進樣,結果如下:
圖3. 在ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱上進行樣品粗篩
從譜圖可見:
優(yōu)化案例一:升麻
調整洗脫梯度,使峰分布更均勻。
優(yōu)化案例二:旋覆花
圖6. 旋覆花-添加劑濃度對分離的影響
圖7. 旋覆花-色譜柱對分離的影響
圖8. 旋覆花在BEH Shield RP18色譜柱上的分析結果
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流動相A:0.1%磷酸
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流動相B:乙腈
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流速:1.0 mL/min
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波長:205 nm+全波長
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柱溫:30度
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進樣量:5 μL
圖9. 梯度表
按照上述條件粗篩樣品,再按照上文中的方式優(yōu)化條件即可。
圖10. 在CORTECS T3色譜柱上進行樣品粗篩
綜上,在ACQUITY UPLC HSS T3/CORTECS T3色譜柱上,使用大梯度粗篩,可以快速判斷樣品的整體峰分布。對簡單樣品通過梯度優(yōu)化即可得到滿意譜圖,但對復雜樣品,除梯度優(yōu)化,還需要考察色譜柱不同鍵合相及規(guī)格、添加劑濃度及種類、柱溫、流速等條件對分離結果的影響,才可以獲得一個滿意的結果。