[肝素回收率≥95%]助力新國家標(biāo)準(zhǔn)的食品中乳鐵蛋白測定
肝素親和柱可特異吸附乳鐵蛋白。
試樣中的牛乳鐵蛋白經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取，再通過肝素親和柱富集凈化后,可以直接用于HPLC分析。
Lubex肝素親和柱與HPLC配合使用可達(dá)到快速測定的目的，改善信噪比，提高檢測方法的準(zhǔn)確度。
柱容量驗證牛乳鐵蛋白回收率≥95%。
乳鐵蛋白（Lactoferrin, Lf）是一種主要存在于哺乳動物乳汁中的糖蛋白，相對分子量約為80KDa。
乳鐵蛋白在體內(nèi)不僅參與鐵的轉(zhuǎn)運，還具有抗 菌、抗病毒、抗氧化和免 疫調(diào)節(jié)的功能。
乳鐵蛋白被認(rèn)為是一種新型的抗 菌、抗 癌 藥 物和具有開發(fā)潛力的食品和飼料添加劑，目前已被廣泛添加于嬰幼兒食品中。
2021年發(fā)布的《食品安 全 國家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測定》（征求意見稿）中，對肝素親和柱的柱容量驗證方法提出了大于80%回收率的要求。
而即將實施的GB 5009.299-2024《食品安 全 國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測定》則進(jìn)一步提高了回收率標(biāo)準(zhǔn)，要求牛乳鐵蛋白回收率達(dá)到至少95%，并且每批次樣品至少測試兩根肝素親和柱進(jìn)行驗證。
市場上主流品牌如G家應(yīng)用于舊國標(biāo)的肝素親和柱回收率在92%~96%之間，略低于新標(biāo)準(zhǔn)的要求。
為了符合*新標(biāo)準(zhǔn)，Lubex推出了專為樣品前處理設(shè)計的肝素親和柱。
本研究采用了符合國家標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行驗證，結(jié)果顯示回收率接近100%，完全符合新標(biāo)準(zhǔn)的要求。
一、試劑配制
磷酸鹽緩沖液Ⅰ：
稱取7.1 g磷酸氫二鈉、58.4 g氯化鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調(diào)pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現(xiàn)配。
磷酸鹽緩沖液Ⅱ：
稱取28.4 g磷酸氫二鈉，加900 mL水溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.5±0.2，加水定容至1000 mL，臨用現(xiàn)配。
0.1%三氟乙酸溶液：
量取1 mL三氟乙酸注入900 mL水中，用水稀釋至1000 mL，過0.45 μm濾膜。
二、樣品處理
牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(5.0mg/mL)：
稱取50mg(精 確至0.1mg)牛乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用水溶解,轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶并定容至刻度,混勻,0℃~4℃條件下保存,可保存3個月。
三、操作程序
活化：
取出Lubex肝素免 疫親和柱， 肝素親和柱先用5mL磷酸緩沖液Ⅱ活化，準(zhǔn)確移取10ml上清液過柱；
用10ml磷酸緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用5mL磷酸緩沖液Ⅰ洗脫，收集洗脫液并用磷酸緩沖液Ⅰ定容至5mL，渦旋混勻，過0.45μm水相針式濾器后待測。
四、操作條件
1)色譜柱: ECOSIL C4 5μm 250mm×4.6mm 300?
2)檢測波長: 280nm
3)柱溫: 30℃
4)進(jìn)樣體積: 50μL
5)流速: 1.0mL/min
6)流動相: 0.1%三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脫參數(shù)見表1。
五、柱容量驗證圖譜
圖一 肝素親和柱1譜圖
圖二 肝素親和柱2譜圖
六、柱容量驗證數(shù)據(jù)
表2 柱容量驗證數(shù)據(jù)
七、實驗結(jié)論
本文按照國標(biāo)方法驗證了Lubex肝素親和柱的柱容量，回收率均＞95%，滿足國標(biāo)對于柱容量的要求。
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