多糖涂敷型手性柱（反相流動(dòng)相）沖洗方法

當(dāng)手性色譜柱分離度下降、

柱壓過(guò)高等色譜柱異?，F(xiàn)象發(fā)生時(shí)，

才需要使用本方法沖洗

以下沖洗步驟及流動(dòng)相體系僅適用于大賽璐多糖涂敷型反相手性柱AD-RH/AD-3R，AS-RH/AS-3R，AY-RH/AY-3R，AZ-RH/AZ-3R，OD-R/OD-RH/OD-3R，OJ-RH/OJ-3R，OX-RH/OX-3R，OZ-RH/OZ-3R，流速僅適用于3/5/10μm, 4.6*150/250mm規(guī)格，對(duì)于其他規(guī)格的手性柱，其沖洗時(shí)所用的流速請(qǐng)根據(jù)各自所能耐受柱壓不同另行調(diào)整。

1、一般情況下，使用常規(guī)方法沖洗色譜柱；若常規(guī)方法無(wú)效，則使用特殊方法一沖洗色譜柱；若特殊方法一無(wú)效，則使用特殊方法二沖洗色譜柱。

2、沖洗過(guò)程中，10μm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)3Mpa，5μm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)6Mpa，3μm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)15Mpa。

3、以下沖洗過(guò)程中涉及的流速僅供參考，實(shí)際操作中以柱壓不超過(guò)以上說(shuō)明為宜。

4、以下沖洗過(guò)程中提到的20倍柱體積，以4.6*150mm規(guī)格柱為例，約為30mL。

沖洗方法

常規(guī)方法：

1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v)，流速0.5ml/min，沖洗20倍柱體積；

2、沖洗結(jié)束，驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn)，看是否柱效有提高。

特殊方法一：

1、用水/甲醇(90/10,v/v)，流速0.5 ml/min，沖洗20倍柱體積；

2、逐漸提高甲醇的比例到100%，然后以甲醇100%，0.3ml/min左右的流速，沖洗20倍柱體積；

3、逐漸增加水的比例至90%，即水/甲醇(90/10,v/v)；

4、沖洗結(jié)束，驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn)，看是否柱效有提高。

特殊方法二：

1、用水/甲醇(90/10,v/v)，流速0.5 ml/min，沖洗20倍柱體積；

2、逐漸提高甲醇的比例到100%，然后以甲醇100%，0.3ml/min左右的流速，沖洗20倍柱體積；

3、再用酸性流動(dòng)相，甲醇/三氟乙酸(100/0.1,v/v)，0.3ml/min的流速，沖洗20倍柱體積；

4、再用中性流動(dòng)相甲醇過(guò)渡，甲醇100%，0.3ml/min的流速，沖洗20倍柱體積；

5、逐漸增加水的比例到90%，即水/甲醇(90/10,v/v)；

6、沖洗結(jié)束，驗(yàn)柱或重復(fù)之前的樣品實(shí)驗(yàn)，看是否有提高柱效。

若按以上步驟沖洗手性柱后

手性柱性能依舊沒(méi)有提高

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（注：本文轉(zhuǎn)載自大賽璐公眾號(hào)）

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